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低轉(zhuǎn)移人肝癌細(xì)胞(MHCC97-L)培養(yǎng)說明書
更新時(shí)間:2018-10-17 點(diǎn)擊量:2009

低轉(zhuǎn)移人肝癌細(xì)胞(MHCC97-L)

貨號(hào):HLCL-029

 

細(xì)胞介紹

該細(xì)胞來源于中山醫(yī)院,生長(zhǎng)較緩慢。

 

細(xì)胞特性

1) 來源:

2) 形態(tài)上皮細(xì)胞,貼壁生長(zhǎng)

3) 含量:>1x106 個(gè)/mL

4) 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

 

細(xì)胞接受后的處理:

1) 收到細(xì)胞后,請(qǐng)檢查是否漏液,如果漏液,請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。

2) 請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。

4) 如果細(xì)胞長(zhǎng)滿(90%以上)請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。

5) 接到細(xì)胞次日,請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。

 

細(xì)胞用途:僅供科研使用。

                       

本公司細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程,供參考

一.培養(yǎng)基培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基(DMEM,GIBCO,貨號(hào)11995-065),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)。液氮儲(chǔ)存。

二. 細(xì)胞處理

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2

2. 加2ml消化液0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化。

3. 輕輕打后吸出,移入15ml離心管中,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

3)細(xì)胞凍存:細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),先要消化處理并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。消化方法按照細(xì)胞傳代方法的1-3驟進(jìn)行,后的重懸液使用血清。懸浮細(xì)胞直接計(jì)數(shù)后離心,用血清重懸浮,DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。

 

注意事項(xiàng):

1. 收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系

2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

 

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