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021-65232515
EF39A\K4 2018-01版
黃曲霉毒素B1
快速檢測試劑盒說明書
一、原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物黃曲霉毒素B1將和微孔條上預包被的偶聯(lián)抗原競爭抗黃曲霉毒素B1抗體,加入酶標記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物黃曲霉毒素B1的含量成負相關(guān),與標準曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物黃曲霉毒素B1的含量。
二、試劑盒特性
飼料 大米、玉米、花生、組織、食用油··········· 2 ppb
黃曲霉毒素B1 ······································ 100%
黃曲霉毒素M1 ······································ 6.6%
黃曲霉毒素B2 ····································· 54.5%
黃曲霉毒素G1 ······································· 8.4%
黃曲霉毒素G2 ······································· 1.7%
飼料 大米、玉米、花生、組織、食用油 ······· 95±35%
1 | 微量測試孔 | 每條8孔,一板12條 | |
2 | 標準液×6瓶 (1ml/瓶) | 0ppb | 0.02ppb |
0.06ppb | 0.18ppb | ||
0.54ppb | 1.62ppb | ||
3 | 酶標記物 | 7ml | 紅色帽 |
4 | 抗體工作液 | 7ml | 藍色帽 |
5 | 底物A液 | 7ml | 白色帽 |
6 | 底物B液 | 7ml | 黑色帽 |
7 | 終止液 | 7ml | 黃色帽 |
8 | 20X濃縮洗滌液 | 40ml | 白色帽 |
9 | 20X濃縮復溶液 | 50ml | 透明帽 |
四、所用儀器、試劑
具備的儀器:酶標儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01g)、氮吹儀、恒溫箱、打印機
微量移液器:單道 20~200µl、單道100~1000µl、多道 30~300 µl
試 劑:甲醇、正己烷
五、樣本前處理步驟
(a)實驗中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時要更換吸頭。
(b)實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,必要時可對實驗器具進行清潔,以避免污染干擾實驗結(jié)果。
配液1 樣本復溶液:
用去離子水將20×濃縮復溶液按1:19稀
釋(1份20×濃縮復溶液+19份去離子水)。
配液2 樣本提取液:
將甲醇與去離子水按7:3比例混合均勻(7份甲醇+3份去離子水)。
(a)組織、飼料、大米、玉米樣本處理方法:
樣本稀釋倍數(shù):40倍
(b)食用油樣本處理方法:
樣本稀釋倍數(shù):40倍
(c)花生樣本處理方法:
中;加入5ml樣本提取液,再加入4ml正己
烷,充分振蕩3min,20℃ 4000r/min以上離
心10min;
樣本復溶液,充分振蕩混勻;
3. 取50µl用于分析
樣本稀釋倍數(shù):25倍
六、 酶標免疫分析程序:
七、結(jié)果判定
結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含黃曲霉毒素B1量成負相關(guān)。
1、粗略判定:
用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,標準液吸光度值分別是:0ppb為2.243; 0.02pb為1.816;0.06ppb為1.415;0.18ppb為0.74;0.54ppb為0.313;1.62ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是0.54ppb~1.62ppb;樣本2的濃度范圍是0.06ppb~0.18ppb,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中黃曲霉毒素B1實際濃度。
2、定量分析
(1)百分吸光率的計算,標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以個標準(0標準)的吸光度值,再乘以100%,即
百分吸光率(%)= | B | ×100% |
B0 |
B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值
(2)標準曲線的繪制與計算
以標準品百分吸光率為縱坐標,以黃曲霉毒素B1標準品濃度(ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標,繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中,從標準曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中黃曲霉毒素B1實際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算,更便于大量樣本的準確、快速分析。
八、 注意事項
九、儲藏條件和保質(zhì)期
提示:酶標板真空包裝袋若有漏氣,酶標板仍然正常有效,不影響實驗結(jié)果,請放心使用。
農(nóng)業(yè)部生物毒素檢測重點實驗室 | 聯(lián)合研制 |
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