影響抗原-抗體結合反應的因素
影響抗原-抗體反應的因素很多,主要包括其自身的性質和外界實驗條件。
1抗原抗體的性質
抗原-抗體反應的整體強度受3個因素控制:抗體對表位的內在親和力,抗原抗體的結合價以及參與反應成分的立體結構。其中親和性和特異性是反應的關鍵因素。
2電解質
抗原抗體發(fā)生特異性結合后,由由親水性膠體變?yōu)槭杷阅z體,電解質的存在會使抗原-抗體復合物失去電荷而沉淀或凝集,出現可見反應。常用0.85%的氯化鈉或各種緩沖溶液作為抗原抗體的稀釋液,用來中和膠體粒子上的電荷,促使抗原-抗體復合物從溶液中析出,形成可見的沉淀物或凝聚物。
3酸堿性
蛋白質具有兩性電離的性質,抗原抗體的反應必須在合適的PH環(huán)境中進行。一般為pH=6.0~8.0,超出此范圍會影響抗原抗體的理化性質,出現假陰性反應。
4溫度
在一定的范圍內適當的溫度會增加抗原抗體分子的運動,增加分子碰撞的機會,使反應速度加快。一般抗原抗體的溫度為37℃,溫度高于50℃,會使結合的抗原抗體解離、變性;溫度太低,反應速度變慢。但某些抗原-抗體反應有其*的適合溫度,如冷凝集素在4℃左右與紅細胞結合hao,20℃以上反而解離。此外適當震蕩或攪拌也可促使抗原抗體分子的接觸,加速反應的進行。
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