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Magbind Gel Extraction Kit

磁珠法瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒

目錄號(hào)：K2515

運(yùn)輸條件：室溫（15-25℃）。

保存條件：Magbeads  2-8℃，其他組分室溫。

本產(chǎn)品僅供科研使用，請(qǐng)勿用于臨床診斷及其他用途

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

　　本試劑盒提供了一種簡(jiǎn)單、快速、高效的用于瓊脂糖凝膠  DNA回收的方法。它可

以從用TAE或TBE制成的瓊脂糖凝膠中回收100 bp以上的DNA片段，回收效率高達(dá)80%。

溶膠液將瓊脂糖膠溶解后，磁珠選擇性的吸附 DNA片段。經(jīng)漂洗后，洗脫得到的 DNA

純度良好，可用于測(cè)序、酶切、PCR、克隆等下游實(shí)驗(yàn)。

　　該試劑盒可與液體工作站或KingFisher核酸提取儀配套使用，簡(jiǎn)單、快速的進(jìn)行大

規(guī)模提取，大大降低了實(shí)驗(yàn)者的工作量和實(shí)驗(yàn)中的人為誤差。

組分說(shuō)明

Time for1 sample      Time for 96 samples

Sampletype     Typical yield   DNA size      (handle)                 (BioRobot)

 Agarose Gel    Up to 80%    100 bp plus     40 min                  1-2 hour

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備及重要注意事項(xiàng)

1. Magbeads嚴(yán)禁冰凍 、離心。水凍和離心可能會(huì)對(duì)Magbeads造成不可逆的損害。

2.電泳時(shí)使用新的電泳緩沖液，以免影響電泳和回收效果。

3.切膠時(shí)，紫外照射時(shí)間應(yīng)盡童短，以免對(duì)DNA造成損傷。

4.第---次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽說(shuō)明在Buffer MW1中加入無(wú)水乙醇并做好標(biāo)記。

5. Magbeads在使用前一定要渦旋震蕩2啾使其充分混勻。

6.如Buffer MG中出現(xiàn)沉淀，請(qǐng)?jiān)?6C水浴鍋中重新溶解，搖勻后即可使用。

7.實(shí)驗(yàn)步驟4、6、8和12中用Thermomixe!震蕩的目的是為使磁珠充分懸浮于溶液中，

以便使磁珠能夠充分吸附核酸，將磁珠表面的雜質(zhì)充分去除或?qū)⒑怂釓拇胖楸砻娉?/span>

分洗脫。不同廠家生產(chǎn)的Thermomixe震蕩效果不同，如1400 rpr時(shí)不能使磁珠充

分混勻，請(qǐng)調(diào)節(jié)震蕩頻率直至磁珠能夠充分混勻。

自備試劑

1.加熱恒溫混勻儀一建議使用 Thermo Fisher設(shè)計(jì)生產(chǎn)的Thermomixero

2.磁力架一建議使用DynaMag"M_

3.無(wú)水乙醇、75%乙醇。

操作步驟

1.在長(zhǎng)波紫外燈照射下將目的條帶從瓊脂糖凝膠中切下(盡童去除多余瓊脂糖膠)，

稱重后將其放入干凈的1.5 m離心管中。

2.向上-步的離心管中加入3倍膠體積的Buffer MG (如果膠塊重0.1 g, 其體積視為

100!)后，將其放入50C、1400 rpr的Thermomixe中震蕩溶膠10分鐘。

注意:如無(wú)Thermomixer.可將高心管放于50仁水浴鍋或金屬浴中孵有10分鐘。期間每隔2分鐘渦旋展蕩5秒鐘。

3.將上-步的離心管從Thermomixe中取下，檢測(cè)腋塊是否*融化以及溶液是否由黃

色變成紫色(如膠塊未*溶解，繼續(xù)在Thermomixer中震蕩融解5分鐘;如溶液變

成紫色，向離心管中加入10以3 M的醋酸鈉溶液)。短暫離心后將其室溫放置5分鐘。

4.向上-步離心管中加入20以Magbeads, 渦旋震蕩5秒鐘后將其放入25C、1400 rpml

的Thermomixe中震蕩結(jié)合5分鐘。

注意: 1) 如果溶液總體積大于1ml.每增加100p!可向高心管中多加入2 y的Megbeds:如果溶

液總體積小于0.5 ml.可將Magbends的用量減少至10 以

2)如無(wú)Themomiser.可將高心管連續(xù)額倒混勻10分鐘。

5.將上- -步的離心管放于磁力架上靜置1份鐘，待Magbeads*吸附于離心管的側(cè)壁

上后*棄去溶液(保持離心管固定于磁力架上)，期間避免接觸Magbeadso

6.向離心管中加入500以Buffer MW1 (加入前檢測(cè)是否已加入無(wú)水乙醇)后，將離心

管從磁力架上取下，渦旋震蕩秒鐘后放入25C、1400 rpr的Thermomixe中震蕩3分鐘。

注意:如無(wú)Thermomixer. 可將高心管渦旋層蕩10秒鐘使Megbead流分懸浮于源洗液中。

7.將上- 步的離心管放于磁力架上靜置1份鐘，待磁珠*吸附于離心管側(cè)壁上后輕

輕顛倒磁力架將離心管蓋上的雜質(zhì)洗落后*棄去溶液(保持離心管固定于磁力架

上)，期間避免接觸Magbeadso

注意:棄去溶液時(shí)。如高心管董上有殘留溶液。需用移液器進(jìn)一步去除。

8.向離心管中加入600 μl 75%的乙醇后，將離心管從磁力架上取下，渦旋震蕩5秒鐘后

放入25C、1400 rpm的Thermomixe中震蕩3分鐘。

注意:如無(wú)Thermomixer. 可將高心管滿旋層蕩10秒鐘使Magbeads充分懸浮于漂洗液中。

9.將上一步的離心管放于磁力架 上靜置1份鐘，待磁珠*吸附于離心管側(cè)壁上后輕輕

顛倒磁力架，將離心管蓋上的雜質(zhì)洗落后*棄去溶液(保持離心管固定于磁力架上)，期間避免接觸Magbeads。

注意:棄去溶液時(shí)。如高心管蓋上有殘留溶液。需用移液暴進(jìn)一步去除。

10.重復(fù)步驟8-9。

11.保持離心管固定磁力架上，用10ul移液器進(jìn)一步去除離心管管底和管蓋上的溶液后室溫放置10分鐘。

12．向離心管中加入30-100 μl Buffer EB或去離子水，將離心管從磁力架上取下，渦旋

震蕩使Magbeads*懸浮于洗脫液后將其放入65℃、1400 rpm的Thermomixer中震蕩洗脫10分鐘。

注意：如無(wú)Thermomixer，可將離心管放于65℃水浴鍋或金屬浴中孵育10分鐘，期間每隔2分鐘渦旋震蕩5秒鐘。

13．將上一步的離心管放置于磁力架上靜置 2分鐘，待Magbeads*吸附后用移液器

將洗脫液轉(zhuǎn)移至新的離心管中-20℃保存?zhèn)溆茫藭r(shí)可以棄去Magbeads。

純化回收得率的計(jì)算

　　我們建議通過(guò)瓊脂糖電泳純化前后的樣品進(jìn)行回收得率的計(jì)算。不建議通過(guò)260

nm處的光吸收值來(lái)計(jì)算回收得率。因?yàn)槿芤褐袉捂?、雙鏈 DNA和dNTP以及一些純化

前的某些雜質(zhì)在260 nm處都有光吸收，這樣在計(jì)算回收前樣品中 DNA濃度時(shí)會(huì)得到一

個(gè)假的、虛高的DNA濃度值。

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