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細(xì)胞信息表
細(xì)胞名稱 B95-8絨猴EBV轉(zhuǎn)化的白細(xì)胞
種屬 絨猴
組織來源 外周血
生長(zhǎng)狀態(tài) 懸浮細(xì)胞
培養(yǎng)條件 培養(yǎng)基類型:RPMI1640培養(yǎng)基
FBS:10%
抗生素:雙抗
培養(yǎng)條件:37℃,CO2:5%
傳代方法 :收到細(xì)胞后,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài):
如果沒長(zhǎng)滿,將培養(yǎng)瓶用75%酒精消毒后在超凈臺(tái)內(nèi)更換新鮮
培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)。
如果細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿(約80%-90%)則傳代后繼續(xù)培養(yǎng)。
貼壁細(xì)胞傳代方法:
1棄去培養(yǎng)基,用不含鈣、鎂離子的PBS洗1-2次。
2加1ml0.25%的胰酶(含0.02%EDTA),讓胰酶與大部分細(xì)胞接觸
后放入37℃培養(yǎng)箱內(nèi),隨時(shí)觀察細(xì)胞狀態(tài)變化,待細(xì)胞大部分變
圓后加*培養(yǎng)基終止消化。
懸浮細(xì)胞傳代方法:可以直接傳代也可以離心法傳代。
1直接傳代是讓懸浮細(xì)胞慢慢沉淀在瓶底后,將上清吸掉1/2-2/3,
吹打細(xì)胞形成細(xì)胞懸液后,分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。
2離心法傳代是將細(xì)胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),1000rpm, 5分鐘,去除上清,加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi),吹打細(xì)胞形成細(xì)胞懸液后,分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。
一般沒有特殊說明,細(xì)胞一般是一傳二。
凍存方法:
70%*培養(yǎng)基,20%FBS,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
儲(chǔ)存:液氮中長(zhǎng)期保存。
1觀察細(xì)胞hao在低倍鏡下觀察,便于整體估計(jì)細(xì)胞密度。
2在運(yùn)輸過程中可能會(huì)導(dǎo)致一些貼壁不牢的細(xì)胞發(fā)生部分脫落,可離心吹打后重新種入瓶中培養(yǎng)。
3收到細(xì)胞后若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、細(xì)胞污染等,請(qǐng)?jiān)谝恢軆?nèi)與我們聯(lián)系。