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BCA法蛋白含量測定試劑盒說明書
微量法
注意:正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定,確保蛋白濃度在20-2000μg/ml內(nèi)。
貨號:YX-W-C202
規(guī)格:100T/96S
產(chǎn)品內(nèi)容:
試劑A:液體×1瓶,4℃保存。
試劑B:液體×1支,4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品:液體×1支,4℃保存。
產(chǎn)品說明:
樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計(jì)算。此外,可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。 測定原理: 堿性條件下,蛋白質(zhì)中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽鍵,能將Cu2+還原成Cu+;2分子的BCA與Cu+結(jié)合,生成紫色絡(luò)合物,在540-595nm有吸收峰,562nm處吸收峰ziui qiang。 自備儀器和用品:
臺式離心機(jī)、恒溫水浴鍋、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸餾水。
工作液配制:臨用前請根據(jù)擬用工作液體積(樣本數(shù)×0.2mL),將試劑A和B按照50:1的比例混合,蓋緊后充分混勻。
操作步驟:
一、樣品中可溶性蛋白質(zhì)提?。?/span>
1. 液體樣品:澄清液體樣品可以直接測定。
2. 組織樣品:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液(自備,根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水),冰浴勻漿,10000rpm,4℃離心10min,取上清,即待測液。(動物樣品常常需要稀釋)
3. 細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后10000rpm,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
二、測定操作:
1. 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長到562 nm,蒸餾水調(diào)零。
| 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測定管 |
蒸餾水(μL) | 4 |
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標(biāo)準(zhǔn)品(μL) |
| 4 |
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待測液(μL) |
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| 4 |
工作液(μL) | 200 | 200 | 200 |
混勻后置于60℃保溫30min,于微量玻璃比色皿/96孔板,于562nm處測定吸光值A(chǔ),分別記為A空白管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A測定管。 |
注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要做一次。
三、計(jì)算公式:
Cpr (mg/mL)= C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)
=0.5×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)
注意事項(xiàng):
本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用!請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途!
實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):
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