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豬偽狂犬病病毒gB抗體阻斷法ELISA檢測(cè)試劑盒說明書
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱:豬偽狂犬病病毒gB抗體阻斷法ELISA檢測(cè)試劑盒
英文名稱:Blocking ELISA Kit For Pseudorabies Virus gB Antibody Test Kit
【規(guī)格】
96T×2/盒
【用途】
檢測(cè)血清、血漿中豬偽狂犬病毒gB抗體,適用于對(duì)豬場(chǎng)疫苗免疫狀況的評(píng)價(jià)以及感染豬的血清學(xué)診斷。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒是用來檢測(cè)豬血清中豬偽狂犬病毒gB抗體的試劑盒。該試劑盒是用豬偽狂犬病毒抗原包被的微量反應(yīng)板,利用阻斷ELISA原理來檢測(cè)豬血清中豬偽狂犬病毒抗體。用酶標(biāo)儀在雙波長(zhǎng)(450nm,630nm)測(cè)定該反應(yīng)體系的吸光度。當(dāng)被測(cè)樣品中含有豬偽狂犬病毒抗體(陽性結(jié)果)時(shí),顯色就會(huì)變淺,當(dāng)被測(cè)樣品中不含有抗豬偽狂犬病毒抗體(陰性結(jié)果)時(shí),顏色就會(huì)變深。樣本的阻斷率可以通過與陰性對(duì)照吸光度的比值來確定。
【主要組成成份】
1 | 抗原包被板 | 96T×2 | |
2 | 酶標(biāo)記物 | 22ml | 黃色帽 |
3 | 樣本稀釋液 | 50ml | 透明帽 |
4 | 陰性對(duì)照血清 | 1ml | 綠色帽 |
5 | 陽性對(duì)照血清 | 1ml | 紅色帽 |
6 | 顯色劑 | 12 ml *2 | 橙色帽 |
7 | 終止液 | 12ml | 藍(lán)色帽 |
8 | 20X濃縮洗滌液 | 50ml | 白色帽 |
9 | 蓋板膜 | 2張 | |
10 | 說明書 | 1份 |
【自備器材】
1.酶標(biāo)儀:雙波長(zhǎng)450/630nm濾光片
2.精確的微量移液器(單道1-100ul、0.5-10ul、多道30-300ul)
3.水浴箱或恒溫箱
4.微量振蕩器
5.洗液吸移裝置
6.一次性槍頭(10ul,200ul)
7.去離子水
【樣本要求】
本試劑檢測(cè)的樣本為豬血清或血漿,樣本應(yīng)無菌采集,2℃~8℃貯存應(yīng)不超過一周,長(zhǎng)期應(yīng)在-20℃以下保存。
【實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備】
1.試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實(shí)驗(yàn)前,先取出置室溫30min,可以獲得最佳結(jié)果。
2.樣本稀釋:用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本和陰性、陽性對(duì)照血清作2倍稀釋(即:60μl血清加60μl樣本稀釋液),混合均勻。
3.配制洗滌液:將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋20倍(即1ml濃縮洗滌液加19ml水),即可使用。注意:使用前要使結(jié)晶*溶解。
【檢驗(yàn)方法】
1.加樣:根據(jù)樣本數(shù)量,取所需板條,檢測(cè)時(shí),設(shè)陰、陽性對(duì)照各2孔,分別加入稀釋好的陰性、陽性對(duì)照血清100μl于相應(yīng)孔中。其余為樣本孔,每孔加100μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本(可做單孔也可雙孔檢驗(yàn))。
2.溫育:加樣后,蓋上蓋板膜,置37℃溫育30分鐘。
3.洗板:甩去孔內(nèi)液體,用洗滌液注滿反應(yīng)板孔,靜置10秒,直接甩出,洗滌3次,最后一次洗滌后在吸水紙上拍干板內(nèi)液體。
4.加酶:每孔加酶標(biāo)記物100μl。
5. 溫育:加好酶標(biāo)記物的反應(yīng)板蓋好蓋板膜,置37℃溫育30分鐘。
6.洗板:同步驟3。
7.顯色:每孔加顯色劑100μl,振蕩混勻,室溫37℃避光反應(yīng)10分鐘。
8.終止:每孔加終止液50μl,振蕩10秒,充分混勻,終止后即讀數(shù)。
9.讀數(shù):以450nm/ 630nm雙波長(zhǎng)檢測(cè),讀取各孔吸光度值(OD值)。
【結(jié)果判定】
在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔OD值,試驗(yàn)成立的條件是陰性對(duì)照OD值大于1.0,陽性對(duì)照的阻斷率均大于60%,若試驗(yàn)不成立,有可能是操作失誤造成,應(yīng)重讀說明書,再操作一次。
S=樣品孔OD值,N=陰性對(duì)照孔平均OD值
阻斷率=(1–S/N)×100%
若被檢樣品的阻斷率小于或等于50%,該樣品判為PRV抗體陰性。
若被檢樣品的阻斷率大于或等于60%,該樣品判為PRV抗體陽性。
若被檢樣品的阻斷率在50%~60%之間,該樣品判為可疑。
【注意事項(xiàng)】
1.本試劑盒僅供研究使用。
2.不要使用過期的試劑盒組份,不要把不同批次的組份混合使用。
3.使用試劑盒之前,一定要仔細(xì)閱讀說明書。
4 使用前,濃縮的洗滌液應(yīng)恢復(fù)至室溫(20~25℃),并搖動(dòng)使沉淀溶解(最好在37℃水浴鍋中加熱5~10分鐘),然后用去離子水作20倍稀釋(例如:50ml的濃縮洗滌液加上950ml蒸餾水),混勻,稀釋好的洗滌液在2~8℃可以存放7-10日。
5.本試劑盒應(yīng)按含有傳染性材料對(duì)待,試驗(yàn)廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘,或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。
6.微孔板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)在室溫中平衡。未用完的液體試劑應(yīng)蓋好瓶蓋,與其它配套組份放入試劑盒中于2℃-8℃避光保存。
7.應(yīng)用微量移液器加入樣本及試劑,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性。
8.加洗滌液時(shí)應(yīng)做到滿而不溢,防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。
9.終止液有腐蝕性,若濺到皮膚或衣物上應(yīng)立即用大量清水沖洗干凈。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
于2℃~8℃避光保存,防止冷凍,有效期12個(gè)月。
【生產(chǎn)日期及批號(hào)】
詳見包裝袋和外包裝盒。
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