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人麻疹病毒 IgG(MV IgG)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱:
通用名:人麻疹病毒 IgG(MV IgG)酶聯(lián)免疫分析試劑盒 使用目的:
本試劑盒用于測定人血清、血漿、或相關(guān)組織液中麻疹病毒 IgG(MV IgG)的含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人麻疹病毒IgG(MVIgG)水平。用純化的人麻疹毒IgG(MV IgG)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中加入麻疹病毒 IgG(MV IgG),再與 HRP 標(biāo)記的麻疹病毒 IgG(MV IgG)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo) 抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并 在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的麻疹病毒 IgG(MV IgG)呈正相關(guān)。 用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人麻疹病毒IgG(MV IgG)的含量。
試劑盒組成
1 | 20 倍濃縮洗滌液 | 30ml×1 瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1 瓶 |
2 | 酶標(biāo)試劑 | 6ml×1 瓶 | 8 | 標(biāo)準(zhǔn)品(270 IU/L) | 0.5ml×1 瓶 |
3 | 酶標(biāo)包被板 | 12 孔×8 條 | 9 | 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 1.5ml×1 瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 說明書 | 1 份 |
5 | 顯色劑 A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板膜 | 2 張 |
6 | 顯色劑 B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1 個 |
標(biāo)本處理及要求
1.血清、血漿標(biāo)本可直接測定; 2.尿液、腦脊液、腹腔液:2000-3000 轉(zhuǎn)/分離心 10 分鐘后,取上清液待測。
3.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。 4.采集后盡早進行實驗,若不能馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上按序設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔 10 孔,在*、第二孔中分別 加標(biāo)準(zhǔn)品 100μl,然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,混勻;再各取 100μl 分 別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,混勻后,在第 三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉;再各取 50μl 分別加到第五、第六孔中;再在第五、 第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取 50μl 分別加 到第七、第八孔中;再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,混勻后從第七、 第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中;再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl, 混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉。( 稀釋后各孔加樣量都為 50μl,濃度分別為180IU/L,120 IU/L,60 IU/L,30 IU/L,15 IU/L)。
加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、測樣待品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣 品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,輕輕晃動混勻。
溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
配液:將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此 重復(fù) 5 次,拍干。
加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。
溫育:操作同 3。
洗滌:操作同 5。
顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
計算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的 OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計算出標(biāo) 準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù), 即為樣品的實際濃度。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未 用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間 控制在 5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD 值 大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔 OD 值的),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計 算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 嚴(yán)格按說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
6.本試劑不同批號組分不得混用。
7.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.底物請避光保存。
檢測范圍:
10 IU/L 200 IU/L
規(guī)格:96 人份/盒
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 個月